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垂吊矮牵牛的组织培养与快速繁殖
(武汉市园林科研所430O81) |
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关键词:组织培养 垂吊矮牵牛 快速繁殖 一、植物名称:垂吊矮牵牛 二、材料类别:紫红色垂吊矮牵牛的叶片及带顶芽的茎段。 三、培养条件:以MS为基本培并基,诱导 及增殖培养基分别为以下几种。 (1) MS+ 6— BA 0。5mg L-1(单位不同)+NAA 0. 1 (2) MS+6- BA1+ NAA0。1 (3) MS+ 6-BA1。5+NAA 0。1 (4) MS+ 6-BAZ+ NAA 0。1 (5) MS+6 -BA3+NAA 0。l (6) MS+6-BAI+NAAO.2 (7)壮苗培养基:MS (8)生根培养基:MS+ IBAO. 5 (9)MS+ IBAO. 5+ AC(lg. L- 1) 上述培养基均为固体培养基,2.5%蔗糖,0.85%琼脂, PH5。8,培养温度(2.5 ± 2)℃,光照 12—14h。d-1 ,光照度 1400—1600LX。 四、生长与分化情况 1.愈伤组织及芽的诱导 取垂吊矮牵牛的幼嫩叶片及带顶芽的茎段,用自来水冲洗干净,在超净工作台上用75%酒精浸泡30 S,再用10%次氯酸钠溶液浸泡9 min,用无菌水冲洗 3次,用消毒滤纸吸干表面水分,将幼嫩叶片切成0。5。0。5 cm左右大小,与带顶芽的茎段一起分别接种于培养基(1)一(6)中培养。15天后开始观察,(l)、(2)号培养基中嫩叶 90%以上已长出愈伤组织,愈伤组织为绿色,质地紧密,且膨大成为大块的愈伤团,其中50%的愈伤组织开始分化出芽;带顶芽的茎段侧芽开始增长,基部膨大,形成愈伤组织。(3)、(4)、( 6)号培养基 90%以上嫩叶长p愈伤组织,愈伤组织为绿色,质地紧密,但只限于叶片四周的切口处,且尚无芽的分化;带顶芽的茎段侧芽有所增长。(5)号培养基嫩叶切口处仅有少量愈伤组织,无芽的分化,带顶芽的茎段侧芽伸长不明显。30天后,(l)、(2)号培养基中的愈伤组织芽的分化率达 10o%,带顶芽的茎段除侧芽外,基部形成的愈伤组织亦分化出大量的丛生芽,每块 1cm X1cm的愈伤组织能分化出芽30—40个,且(1)号培养基多于(2)号培养基,与(1)、(2)号培养基相比,(3)、(4)、(5)、(6)号培养基虽然叶片形成的愈伤组织也能分化出芽,但每块愈伤组织分化出的芽大大少于前者,特别是(5)号培养基,每块愈伤组织仅分化出1,3个芽。由此可见,低浓度的6——BA对垂吊矮牵牛的分化更有利,所以,我们在以后的快速繁殖中多采用(1)号培养基。 2.快速繁殖 将已分化出芽的愈伤组织分割切小,转接入(1)号培养基中,可以获得大量的丛生芽,每隔15—20天进行一次,可以不断地获得大量的试管苗。 3.生根与移栽 将带有大量丛生芽的愈伤组织转入不含激素的MS培养基(7)中,丛生芽不再增殖,而是起到壮苗的作用,以利生根。10天后,当试管苗长到2 cm左右时,切下转入生根培养基(8)。(9)中,7—10天后,(8)号培养基中的试管苗可长出 1—2 cm长的多条不定根,根短而粗壮;(9)号培养基中的试管苗长出多条细而长的不定根。将生根的苗打开封口膜在室内炼苗l一2天,小心取出苗,洗净培养基,栽入用多菌灵处理过的泥炭土十珍珠岩(1:1)基质中,当阳光强时可适当遮阴,温度保持在25—32℃,空气相对湿度 60%一 75%, 1— 2天浇水1次,15天后,(8)号培养基中出苗成活率达99%,而(9)号培养基中出苗成活率仅为70%。所以生根培养基选择(8)号较好。 五、发现与问题 通过利用F.代种子萌发获得的植株与试管苗对照来看,试管苗长得更丰满,叶片更饱满,茎更粗壮,花也更多。 经过半年多的组培,我们还发现了一些问题,垂吊矮牵牛继代次数过多,愈伤组织由绿色转成黄绿色,且分化出的试管苗也变黄,茎变细,联体植株也由原来的千分之二上升到百分之二。所以,我们只能用叶片重新进行诱导,以确保试管苗的品质。
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